INYC00010  Millipore 帶正電尼龍卷膜西方蛋白印跡

Northern 和 Southern Blotting，以及 Colony 和 Plaque Lifts

Millipore 提供了一種用于核酸應(yīng)用轉(zhuǎn)印膜選擇。 使用帶正電的 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜可以在 Southern blotting、Northern blotting 和 colony/plaque lifts 實驗中獲得出色的結(jié)果。 Immobilon-NC Nitrocellulose轉(zhuǎn)印膜，是主要的 Southern 和 colony/plaque 實驗方案中Z初使用的膜，也可作為一種靈敏度較低但更經(jīng)濟(jì)的選擇。
 

說明: Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍卷膜，0.45 µm，30 cm x 3.3 m

商標(biāo)名: Immobilon

數(shù)量/包裝: 1

應(yīng)用: Southern blotting、Northern blotting、菌落/噬菌轉(zhuǎn)印、Dot/Slot blotting 和 DNA 分析

濾膜孔徑，µm: 0.45

相容的染料: Non-applicable

可潤濕性: 親水

主要吸附機(jī)制: 離子，紫外線固定后為共價的

濾膜尺寸，cm x cm: 30 x 330

替代物: INCP 000 10（核酸應(yīng)用）

濾膜代碼: INYC

濾膜顏色: 白色

產(chǎn)品名稱: Immobilon-Ny+ Transfer Membrane

濾膜表面: 光面

Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍轉(zhuǎn)印膜

Immobilon-Ny+ 是一種帶正電的尼龍轉(zhuǎn)印膜，非常適合于可靠與可重現(xiàn)的轉(zhuǎn)移、固定、雜交及隨后的重復(fù)雜交實驗。 其表面均一分布的正電荷密度確保得到Z高的靈敏度和Z低的背景信號。 此膜經(jīng)強化處理具有超長的耐久性，這一點對于重復(fù)雜交試驗至關(guān)重要。

可提供詳細(xì)的實驗方案，在使用 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜時可用于優(yōu)化轉(zhuǎn)印結(jié)果。
 

• 靈敏度Z高，而背景信號Z小
   
• 非常出色的重復(fù)雜交特性
   
• 在化學(xué)發(fā)光法和放射性檢測系統(tǒng)中均表現(xiàn)出色

INYC00010  Millipore 帶正電尼龍卷膜西方蛋白印跡

性能

Southern Blotting

直接比較三種帶正電尼龍膜在各自優(yōu)化實驗方案下的表現(xiàn)：每種膜在其推薦的紫外波長照射下交聯(lián)。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜的雜交信號是其它兩種膜的 2 倍。

12 次重復(fù)雜交之后的信號強度

尼龍膜在 254 nm 交聯(lián)，并進(jìn)行了多次重復(fù)雜交，依次為：用 ³²P 標(biāo)記探針做 2 次雜交，4 次模擬雜交，用 ³²P 標(biāo)記探針做第 7 次雜交，然后進(jìn)行 5 次模擬雜交以及用 ³²P 標(biāo)記探針做第 13 次雜交。 在每個雜交周期之間，將膜置于 0.4M NaOH 溶液中，在 45°C 下洗提 30 分鐘。 模擬雜交與真實雜交*一樣，區(qū)別在于未加 ³²P 標(biāo)記探針。 在整個重復(fù)雜交過程中， Immobilon-Ny+ 的信號強度是競爭產(chǎn)品 A 和 B 的兩倍。

檢測靈敏度

將凝膠上 DNA 的量減少到 0.01 ng。 0.1 lane（條帶）中的 2.2 和 2.0 kbp 帶分別與 DNA 的 0.48 和 0.42 pg 相對應(yīng)。 大約相當(dāng)于 10 µg 人類基因組 DNA 中一個單拷貝基因序列。 可通過對探針濃度加倍來提高靈敏度。 在 0.01 ng 條帶中，與競爭產(chǎn)品 A 相比，Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜靈敏度稍高，而背景信號更低。

用化學(xué)發(fā)光檢測進(jìn)行 Northern Blotting

鼠肝的全部 RNA （1 µg） 在甲醛瓊脂糖凝膠中電泳分離，然后通過毛細(xì)作用轉(zhuǎn)印到 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜和競爭產(chǎn)品帶正電尼龍膜 “A”。 與烘焙相比，通過紫外交聯(lián)固定RNA 能增強信號。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜比競爭產(chǎn)品 A 表現(xiàn)出更高的靈敏度。

Colony Lifts

將載有 pUC19 或 pLH2（2.0  kbp λ 噬菌體 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19）的 JM109 混合細(xì)菌懸浮液置于瓊脂培養(yǎng)皿中，在 37°C 下培養(yǎng)過夜。 將培養(yǎng)皿在 4°C 下冷卻30 分鐘，將菌落（直徑大約 1–2 mm）轉(zhuǎn)印至一片 82 mm 直徑的 Immobilon-Ny+ 圓片膜上，或轉(zhuǎn)印至競爭產(chǎn)品帶正電的尼龍膜上。 膜上的 DNA 在254 nm， 60,000 µJoules/cm² 紫外光照射下  交聯(lián)。 然后用 a ³²P 標(biāo)記的 DNA 探針對膜進(jìn)行雜交，并使用磷屏成像系統(tǒng)顯色。